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Pág. 176608 NORMAS LEGALES Lima, domingo 8 de agosto de 1999 Que el Artículo 6º del precitado Decreto Supremo indica que el Instituto del Mar del Perú - IMARPE determinará el protocolo a seguir para el desarrollo de las pruebas necesa- rias para la expedición del Certificado Sanitario/Patológico a que se hace referencia en el Artículo 4º del citado Decreto Supremo, así como en el monitoreo del medio acúatico y de los organismos que se presumen actúen como vectores de las enfermedades llamadas de la "Mancha Blanca" (WSSV) y "Cabeza Amarilla" (YHV); Que mediante Oficio Nº DE-100-175-99-IMP/PE de fecha 20 de julio de 1999, el Instituto del Mar del Perú - IMARPE, alcanzó a la Dirección Nacional de Acuicultura una propues- ta de protocolo para la certificación y monitoreo con fines de detección de los virus causantes de las enfermedades de la "Mancha blanca" y de la "Cabeza amarilla" en langostinos Peneidos; Estando a lo informado por la Dirección Nacional de Acuicultura y con la visación de la Oficina General de Asesoría Jurídica ; De conformidad con lo establecido en el Decreto Ley Nº 25977 - Ley General de Pesca, su Reglamento aprobado por Decreto Supremo Nº 01-94-PE y en el Decreto Supremo Nº 009-99-PE ; y, Con la opinión favorable del Viceministro; SE RESUELVE: Artículo 1º .- Aprobar el protocolo para la certificación y monitoreo con fines de detección de los virus causantes de las enfermedades de la "Mancha blanca" y de la "Cabeza amari- lla" en langostinos Peneidos, que en anexo forma parte integrante de la presente Resolución. Artículo 2º .- La Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos y los laboratorios autorizados por el Ministerio de Pesquería quedan obligados a implementar el precitado protocolo; y si como consecuencia de los estudios, se encuentran indicios de la presencia de los virus de la "mancha blanca" o de la "cabeza amarilla", deberán informar de este hecho inmediatamente a la Dirección Regional de Pesquería de Tumbes, adjuntando copia del respectivo análisis (repor- te de laboratorio). Regístrese, comuníquese y publíquese. GUSTAVO CAILLAUX ZAZZALI Ministro de Pesquería PROTOCOLO PARA LA CERTIFICACION Y MONITOREO CON FINES DE DETECCION DE LOS VIRUS CAUSANTES DE LAS ENFERMEDADES DE LA "MANCHA BLANCA" Y DE LA "CABEZA AMARILLA" EN LANGOSTINOS PENEIDOS 1. PROTOCOLO PARA LA EMISION DEL CERTIFI- CADO SANITARIO Para la detección de los virus que producen la enferme- dad de la "mancha blanca" (White Spot Syndrome Virus – WSSV) y la enfermedad de la "cabeza amarilla" (Yellow Head Virus – YHV), en los organismos y productos que se importen con fines de acuicultura y para consumo humano directo, se utilizará la técnica de la Reacción en Cadena de la Polimera- sa (Polymerase Chain Reaction – PCR). 1.1 Tamaño de la muestra a) Para organismos vivos A efecto de llevar a cabo el muestreo de los lotes corres- pondientes de langostinos vivos, en cualquiera de sus fases de desarrollo, excepto reproductores; de acuerdo al valor establecido para una prevalencia del 2% y un nivel de confianza del 95%, se tomará del lote el número de organis- mos indicados en la tabla siguiente: Tamaño del lote Tamaño de la muestra 50–100 50 101 –250 75 251 –500 110 501 –1000 130 1001 –2000 140 2001 –10000 145 >10000 150 Cuando se trate de reproductores, todos los organismos deberán ser analizados para garantizar la detección precisa de los patógenos causales de las enfermedades materia de la certificación.b) Para organismos en estado latente, productos y subproductos b1) Artemia (Artemia spp). Presentada en latas, deshidratada, liofilizada o en hojue- las, el tamaño de muestra será del 1% del contenido. En presentación congelada, se tomará una muestra que repre- sente el 5% del lote. En ambos casos las muestras se tomarán por triplicado. b2) Langostino congelado Por cada lote deberá tomarse un bloque de 20 x 20 cm. b3) Poliquetos Por cada lote se tomará una muestra que represente el 5% de éste. 1.2 Método de obtención de la muestra a) Para organismos vivos Será extraída en forma no aleatoria, es decir deberá ser sesgada. Primero se tendrá que seleccionar los individuos que se muestren débiles o moribundos (tantos como se pueda) y se completará el tamaño de muestra con especímenes aparentemente sanos extraídos al azar. Para la obtención de estos últimos, y dependiendo de su tamaño, previamente a la extracción deberán ser distribuidos de manera homogénea en el mismo volumen de agua del recipiente que los contenga, mediante un movimiento circular suave. Para el caso de postlarvas (PL), con el fin de facilitar la selección, serán sometidas a una prueba de estrés con forma- lina mediante el siguiente procedimiento: - Colocar los individuos en recipientes, a una densidad de 1000 PL/1. - Airear fuertemente el agua. - Añadir formalina al agua hasta una concentración de 100 – 150 ppm y mantener por 30 minutos. - Hacer circular el agua en remolinos para concentrar en el centro a las PL débiles (presuntamente enfermas). - Extraer a los individuos que se observen estar débiles o moribundos. b) Para organismos en estado latente, productos y subproductos En el caso de las muestras de artemia, langostinos congelados y poliquetos, se deberán tomar de manera alea- toria, de tal manera que sean representativas con respecto al lote. 1.3 Preparación y envío de las muestras a) Para organismos vivos Para nauplios, larvas y postlarvas de langostinos, se procurará que las muestras constituidas de ejemplares vivos lleguen a su destino en tal condición; enviándose al labora- torio debidamente empacadas y rotuladas. Alternativamente, las muestras podrán prepararse de acuerdo a cualquiera de los siguientes procedimientos: - Colocando los individuos completos en recipientes de tamaño adecuado que contengan etanol al 96%. - Disecando los órganos blanco y colocándolos en hielo seco. En su defecto, se puede utilizar hielo normal en sufi- ciente cantidad y empacarlos en recipientes herméticos. - Disectando los órganos blanco, macerándolos a conti- nuación y colocándolos en recipientes de tamaño adecuado previamente llenados con etanol al 96% en una relación 1:10. Se recomienda que una parte sea preservada en hielo seco y la otra en alcohol etílico 96%. En el caso de reproductores o langostinos de suficiente talla, extraer hemolinfa o pleópodos del organismo siguiendo las técnicas recomendadas por Lightner (1996). Para el caso de la hemolinfa utilizar una jeringa de tamaño proporcional al ejemplar, colocando a continuación la hemolinfa extraída en un tubo con cierre hermético debidamente tratado con un anticoagulante (EDTA, citrato de sodio o heparina). Los tubos, debidamente rotulados, deberán colocarse en una hielera con suficiente cantidad de hielo para su envío al laboratorio. b) Para organismos en estado latente, productos y subproductos . En el caso de las muestras de Artemia, langostinos congelados y poliquetos, se deberán colocar en bolsas de plástico con cierre hermético, las que se empacarán en cajas de poliuretano con hielo seco. Las muestras, tanto de organismos vivos como las de organismos en estado latente, productos y subproductos, deberán ser remitidas inmediatamente a los laboratorios