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Pág. 215579 NORMAS LEGALES Lima, domingo 13 de enero de 2002 celda de 1 cm para muestras concentradas y de 5 cm para muestras diluídas. - Hacer un blanco de reactivos con agua destilada para corregir la absorbancia medida por sustracción. e) Determinación de la concentración de nitritos - Solución estándar: a partir de una solución estándar de 10 µmol/L de nitrito de sodio, se prepara una serie de concentraciones para determinar su factor de cali-bración. - Muestra: a 25 mL de la muestra añadir inmediatamente 0,5 mL del reactivo sulfanilamida, mezclar y dejar repo-sar 2 a 8 minutos. - Añadir 0,5 mL del reactivo dihidrocloruro de N-(1-naf- til) etilendiamina, agitar y esperar 10 minutos para quela solución logre su máxima intensidad de color. El color es estable durante 2 horas. - Medir la absorbancia de la muestra en el espectrofo- tómetro, a una longitud de onda de 543 nm, usando una celda de 1 cm para muestras concentradas y de 5 cm para muestras diluídas. - Hacer un blanco de reactivos con agua destilada para corregir la absorbancia medida por sustracción. - Cálculo de la concentración de nitritos: C = (Ac x F 1) Donde: C = Concentración de nitritos en la muestra (µmol NO2.L-1) Ac = Absorbancia corregida F1= Factor de la curva de calibración f) Cálculos - Factor de la columna de reducción (F2): F2 = 10 / (As-Ab) Donde:As = Absorbancia del estándar de columna (están- dar de 10 µmol.L -1 de KNO3) Ab = Absorbancia del blanco La eficiencia de la columna para una solución están- dar de 10 µmol.L-1, se determina porque su absorban- cia no debe ser menor que 0,450. Si 20 < F2 < 22.2, entonces la columna de reducción está lista para serutilizada. - La concentración de nitratos se calcula con la siguiente fórmula: N (µmol.L -1) = (Ac x F2) – C Donde: N = Concentración de nitratos (µmol NO3.L-1) Ac = Absorbancia corregidaF 2= Factor de la columna de reducción C = Concentración de nitritos en la muestra (µmol NO2.L-1) N (mg NO3.L-1) = N (µmol.L-1) * (0,014) G. DETERMINACION DE FOSFATOS METODO: Espectrofotométrico. REFERENCIAS STRICKLAND, J. D. and T.R. PARSONS 1968. A manual of seawater analysis. Research Board of Canada. Bull.N° 125. GRASSHOFF K., K. KREMLING and M. EHRHARDT 1999. Methods of seawater Analysis.COLECTA Y PRESERVACION La colecta de agua de mar para muestras de superficie se realiza mediante un recipiente plástico (balde), y para lasde profundidad se utilizan las botellas Niskin. El agua es colectada en botellas de polietileno de 100 mL, previamen- te enjuagadas con el agua de mar a ser analizada. Si lamuestra tiene mucho material particulado en suspensión se recomienda filtrar (filtro de 0,45 um y de acetato de ce- lulosa) y refrigerar inmediatamente si el análisis se realizadentro de las 24 horas. En caso contrario, congelar la mues- tra por un tiempo màximo de 72 horas hasta su análisis INTERFERENCIAS Los iones arsenato producen un color similar al fosfato, pero puesto que su concentración natural en el mar es de sólo 0,01-0,03 µmol.L -1, no interfieren seriamente en la determinación de fosfato.Puesto que un alto contenido de sulfuro de hidrógeno está generalmente asociado con un alto contenido de fosfato, puede eliminarse el efecto del sulfuro por simpledilución de la muestra con agua destilada. Si acaso la concentración de fosfato fuera tan baja que hiciera impo- sible diluir, debe oxidarse el sulfuro con agua de bromo al0,9 % agregada a la muestra acidificada (0,2 mL de áci- do 4,5 µmol.L -1 por cada 100 mL de muestra). EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS Equipos- Espectrofotómetro UV-Visible - Balanza Analítica (0,1 mg)- Destilador Eléctrico - Bomba de vacío eléctrica Materiales - Erlenmeyer 125 mL - Pipeta Graduada de 10 mL - Pipetas volmétricas de 1, 2, 5, 10, 20 mL tipo A - Fiolas de 100 mL tipo A- Probetas de 50 mL - Embudo de vidrio - Kitasato de 1 L- Espátulas - Bombillas Succionadoras - Celdas de absorción de luz de 1 y 5 cm- Papel de filtro de acetato de celulosa de 0.45 um Reactivos- Acido sulfúrico p.a. (140 mL/900 mL agua destilada) - Acido ascórbico p.a. 54 g.L -1 - Tartrato antimonil p.a. 1,36 g.L-1 - Molibdato de Amonio p.a. 30 g.L-1 - Fosfato dihidrógeno de potasio p.a.- Agua destilada - Mezcla de reactivos (T abla A.4) PROCEDIMIENTO ANALITICO a) Curva de Calibración- Secar aproximadamente 2 gr de fosfato dihidrógeno de potasio p.a., a 105° C durante 2 horas. - Pesar 0,816 g de KH 2PO4y enrasar a 1 L (solución estándar I). - Preparar una solución con 60 µmol.L-1, a partir de la solución anterior (solución estándar II). - Preparar soluciones de concentraciones: 0,6; 1,2; 1,8; 2,4; 3,0; 3,6 y 4,2 µmol.L-1 a partir de la solución es- tándar II. - Tomar 25 mL de cada solución y agregar 2,5 mL de la mezcla de reactivos (T abla - A.4), agitar y esperar entre 30 minutos y 2 horas. - Leer la absorbancia en el espectrofotómetro a una longi- tud de onda de 885 nm, utilizando una celda de 1 cm. - Hallar el factor F por regresión lineal. b) De la muestra- Preparar la mezcla de reactivos, de acuerdo a la T abla A.4, calculada para 25 muestras.