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Pág. 215578 NORMAS LEGALES Lima, domingo 13 de enero de 2002 d) Cálculos - Sin dilución: DBO5(mg.L-1 ) = [ (C1 – C2)] Donde:DBO 5 = Demanda bioquímica de oxígeno a 5 días (mg.L- 1) C1= Concentración de oxígeno disuelto de la mues- tra, tiempo inicial, en mg.L-1 C2= Concentración de oxígeno disuelto de la mues- tra, tiempo = 5 días en mg.L-1. - Con dilución simple: DBO5 (mg.L-1) = [ (C1 – C2)] / fd Donde: DBO5= Demanda bioquímica de oxígeno a 5 días (mg.L- 1). C1= Concentración de oxígeno disuelto de la mues- tra diluida, tiempo inicial. C2= Concentración de oxígeno disuelto de la mues- tra diluida, tiempo = 5 días. fd = (A/VT) = Fracción volumétrica decimal de la mues- tra empleada en la dilución. A = Alícuota de la muestra empleada para preparar la dilución (mL). VT= Volumen final en el frasco de dilución (300 mL). F. DETERMINACION DE NITRATOS METODO:Espectrofotométrico REFERENCIAS STRICKLAND, J. D. and T.R. PARSONS 1968. A manual of seawater analysis. Research Board of Canada. Bull. N° 125. GRASSHOFF K., K. KREMLING and M. EHRHARDT 1999. Methods of seawater Analysis. COLECTA Y PRESERVACION La colecta de agua de mar para muestras de superficie se realiza mediante un recipiente plástico (balde), y para las de profundidad se utilizan las botellas Niskin. El agua es colecta- da en botellas de polietileno de 100 mL, previamente enjua-gadas con el agua de mar a ser analizada. Si la muestra tiene mucho material particulado en suspensión se recomienda fil- trar (filtro de 0,45 um y de acetato de celulosa) y refrigerarinmediatamente, si el análisis se realiza dentro de las 24 ho- ras. En caso contrario, congelar la muestra por un tiempo màximo de 72 horas hasta su análisis. INTERFERENCIAS En aguas muy costeras, concentraciones altas de fosfa- tos pueden interferir en su análisis. Concentraciones de 25 µmol/L de fosfato disminuyen la reducción en un 40 %y 2,5 µmol/L de fosfato pueden inhibir la reducción en un 10 %. En general, las concentraciones de fosfato presen- tes normalmente en el agua de mar son bajas para noocasionar problemas de interferencia significativos. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOSEquipos - Espectrofotómetro UV – Visible - Balanza analítica (0,1 mg) - Bomba de vacío eléctrica- Destilador eléctrico Materiales- Columna de reducción de vidrio de 20-25 cm con 8 a 10 cm de diámetro interno, con llave de doble paso- Pipetas graduadas de 5 y 10 mL - Pipetas volumétricas de 1, 2, 5 10, 20, 25 y 50 mL tipo A - Fiola de 1 L tipo A- Fiolas de 100 mL tipo A - Probetas de 50 mL tipo A - Embudo de vidrio- Espátulas - Pipeteadores de 1 a 10 mL - Celdas de absorción de luz de 1 cm y 5 cm- Matraz erlenmeyer de 125 mL - Algodón de fibra de vidrio - Papel de filtro de acetato de celulosa de 0.45 um. Reactivos - Cadmio granulado (Cd) - Cobre en lámina (Cu) - Cloruro de Amonio concentrado 350 g.L -1 (NH4Cl) - Cloruro de Amonio diluído (25 mL NH4Cl concentrado.L-1) - Acido clorhídrico 1% (v/v) HCl- Acido Nítrico 1% (v//v) HNO 3- Sulfato de Cobre pentahidratado 2% (w/v)- Nitrato de Potasio p. a. (KNO 3) - Sulfanilamida 10 g.L-1 (C6H8N2O2S) - Dihidrocloruro de N-(1-naftil)etilendiamina 1 g.L-1 (C12H14N2.2HCl) PROCEDIMIENTO ANALITICO a) Tratamiento previo de cadmio granulado - Lavar con ácido nítrico 1 % (v/v) y enjuagar con bas- tante agua destilada. - Lavar con ácido clorhídrico 1 % (v/v) y enjuagar con abundante agua destilada. - Lavar con sulfato de cobre pentahidratado 2 % (w/v) y enjuagar con agua destilada. b) Preparación de la columna En los extremos de la columna de vidrio se coloca algo- dón de vidrio y láminas de cobre, mientras que en la par- te central, el cadmio granulado es empaquetado en for- ma homogénea, evitando la formación de burbujas. c) Cálculo del factor de la columna de reducción - Secar aproximadamente 2 g de nitrato de potasio p.a., a una temperatura de 105ºC durante 2 horas. - Preparar una solución estándar (I), pesando 1,02 g de KNO3y enrasando a 1 L. - Preparar una solución estándar (II) de 10 µmol.L-1, a partir de la solución estándar (I), debe prepararse dia-riamente. - A 500 mL de esta solución, agregar 10 mL de cloruro de amonio concentrado y agitar. - Verter a la columna de reducción, la solución antes preparada y regular el flujo de salida entre 10 y 12 mL/minuto. - Recoger de la columna los últimos 25 mL de solución y agregarle 0,5 mL de la solución de sulfanilamida, agitar y esperar entre 2 y 8 minutos. - Agregar 0,5 mL de la solución de N-(1-naftil)-etilen- diamina, agitar y esperar por lo menos 10 minutos. - Leer la absorbancia en el espectrofotómetro, con una celda de 1 cm y a una longitud de onda de 543 nm. d) De la muestra- A 50 mL de agua de mar agregar 1 mL de la solución concentrada de cloruro de amonio. - Verter la muestra en la columna reductora. - Recibir los primeros 20 mL de la muestra y desechar- los - Colectar los subsiguientes 25 mL de muestra y añadir inmediatamente 0,5 mL del reactivo sulfanilamida, mezclar y dejar reposar 2 a 8 minutos. - Añadir 0,5 mL del reactivo dihidrocloruro de N-(1-naf- til) etilendiamina, agitar y esperar 10 minutos para que la solución logre su máxima intensidad de color. El co-lor es estable durante 2 horas. - Medir la absorbancia de la muestra en el espectrofotó- metro, a una longitud de onda de 543 nm, usando una