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Pág. 215577 NORMAS LEGALES Lima, domingo 13 de enero de 2002 d) En el caso del blanco el peso inicial del balón seco será A1 (en gramos). e) Para la 2ª y 3ª extracciones se procede como en el punto c. f) Enjuagar la pera de separación con 5 mL de hexano, el cual se recibe en el balón que contiene la muestra (pre- via filtración con sulfato, punto c). g) Concentrar la muestra separando el solvente por des- tilación al vacío con un rotavapor hasta aproximada- mente 1 mL y secar en la estufa a 105 °C a pesoconstante (Peso final: P 2). Condiciones del rotavapor: 68 °C (baño maría) y 10 pulg Hg (vacío). h) Para el blanco se procede de la misma manera. Una vez separado el solvente, registrar peso constante A2(g). i) Cálculos: La concentración de los aceites y grasas se calcula con la siguiente fórmula : AG (mg.L-1) = [(P2-P1) - B] x 1000/V Donde: AG = Aceites y grasas (mg.L-1). P2= Peso del balón + residuo (g) .Corresponde a la muestra. P1. = Peso inicial del balón (g) . A2= Peso final del blanco : Peso del balón + residuo del solvente (g) A1= Peso inicial del blanco: Peso del balón (g). B = Blanco del solvente (A2-A1) en el balón g. V = Volumen de muestra (L). E. DETERMINACION DE LA DEMANDA BIOQUIMICA DE OXIGENO (DBO5) METODO Determinación de la Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO5)en agua de mar, aguas superficiales y zona de mezcla por dilución simple. REFERENCIAS APHA-AWWA-WPCF . 1992. Standard Methods for Exa- mination of Water and W astewater.18thed. Part 5210B. Washington. 1134 p. IMARPE, 1995. Procedimiento Estándar de Operación: Metodología para la determinación de Demanda Bioquí- mica de Oxigeno (DBO5) en agua de mar, aguas superfi- ciales y zona de mezcla. Área de Evaluación de Impacto Ecológico. DMPAM. PEO-DBO5/DS-001. International Organization for Standarization. 1983. Water Quality Determination of Biochemical Oxygen Demand after n days (BODn). Dilution and Seeding Method. FirstEdition. ISO5815. 1983-10-01D. COLECTA Y PRESERVACIONLas muestras superficiales o de fondo colectadas a tra- vés de un balde o botellas Niskin respectivamente, serecepcionan en frascos de vidrio o plástico limpio de 1 L. Para evitar la descomposición de la muestra por acción microbiana, mantener la muestra entre 0 a 4°C hasta unperíodo máximo de 24 horas desde su colecta. INTERFERENCIASLas que se indican para la determinación de oxígeno di- suelto por el método de Winkler-Azida (ISO 1983) causa-das por sustancias oxidantes, reductoras y material sus- pendido. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS Equipos- Incubador DBO 20 ± 1°C - Estufa de 50 a 150 °C- Potenciómetro - Destilador - Oxímetro polarográfico y sensor con accesorios- Bureta automática de 10 mL - Difusor de aire (blower) - Refrigeradora Materiales - Frascos de DBO de 250 a 300 mL con tapa esmerila- da y con tapa de plástico de seguridad - Fiolas de 100 mL, 500 mL - Pipetas graduadas de 1, 5 y 10 mL - Probetas de 100 mL y otros materiales para la deter- minación de oxígeno disuelto. Reactivos a) Sales de dilución: - Solución Buffer Fosfato: KH2PO4, 8,5 g; K2HPO4, 21,75 g; Na2HPO4. 7H2O, 33,4 g y NH4Cl, 1,7 g enrase a 1 litro - Solución de nutrientes: Sulfato de Magnesio Heptahidratado: 22,5 g/LCloruro de Calcio: 27,5 g.L -1 Cloruro férrico Hexahidratado: 0,25 g/L b) Solución estándar de control: 150 g de glucosa en 1 L 150 g de ácido glutámico en 1 LMezclar ambas soluciones en proporción 1:1 c) Reactivos para determinación de oxígeno disuelto (Anexo 3.A) PROCEDIMIENTO ANALITICO a) Preparación del agua de dilución - A partir del agua destilada se prepara el agua de dilución, agregar 1 mL de cada una de las soluciones nutrientes y de la solución buffer por litro de agua destilada. - Airear (empleando blower) hasta la saturación de oxí- geno (~10 mL.L-1) por una hora. Emplear la solución inmediatamente de ser preparada o a más tardar den- tro de las 8 horas. Estos dos pasos son suficientes(en la preparación del agua de dilución) antes de ini- ciar los análisis de muestras de agua de bombeo. b) Preparación de blancos de control - Colectar el agua de dilución en dos frascos de vidrio DBO 5de 300 mL. - Determinar el oxígeno disuelto inicial (ODi) en el pri- mer frasco mediante el método de Winkler azida o eloxímetro polarográfico. - Incubar el segundo blanco a 20 °C +/- 1ºC por 5 días. Al cabo del quinto día determinar el oxígeno disueltofinal (OD f). - El consumo de oxígeno en el blanco no debe exceder 0,2 mg.L-1 para considerar válido el análisis de mues- tras. c) Tratamiento de muestras 1. Medir el pH de la muestra, que debe estar entre 6-8. En caso contrario neutralizar con NaOH 20 g.L-1 o HCl 0,5 mol.L-1 (evitar una dilución mayor al 0,5 %). 2. Las muestras de agua de mar distantes a zonas con influencia de descargas, no necesitan diluirse. La muestra se incuba directamente en frasco de 300 mL. Trabajar con muestras réplicas. 3. Para las muestras provenientes de zona de mezcla se realiza una dilución simple utilizando un factor de dilución (fd) de acuerdo a la Tabla A.3. Trabajar conmuestras réplicas. 4. Determinar el oxígeno disuelto inicial (0 días) del pri- mer grupo de muestras réplicas, mediante el métodoWinkler azida o el oxímetro polarográfico. 5. Incubar el segundo grupo de muestras réplicas a 20°C ± 1°C, y proceder a evaluar el oxígeno disuelto final alquinto día de incubación con el método respectivo. Tabla A.3. Diluciones recomendadas para la determinación de DBOn CLASIFICACION FACTOR DE RANGO DE OBSERVACIONES DILUCION (fd=A/VT) ALICUOT AS (A, mL) Agua de mar 5 x 10-1 - 1 150-300 Zona distante y sin influencia de descargas Zona de mezcla o 3 x 10-2 – 1 10-300 Zona con influencia influencia 3 x 10-2 – 5x10-110-150 de descargas