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NORMAS LEGALES El Peruano Lima, sábado 14 de julio de 2007 349042 (*) En las operaciones analíticas, estos valores son indicadores de ausencia. (**) Para 4 utensilios.(***) Indicar el área muestreada, la cual debe ser mayor o igual a 100 cm2. 8.4. Procedimiento para el control microbiológico con aplicación del método del enjuague Procedimiento de análisis microbiológico Sea por métodos rápidos o convencionales, los ensayos microbiológicos se realizarán utilizando métodos normalizados por organismos internacionales como la ISO, AOAC, FDA/BAM, ICMSF, APHA/CMMEF, entre otros; utilizando la técnica de recuento en placa. Cálculo y expresión de resultados a) Cálculo Para super fi cies vivas: el número de colonias obtenidas (ufc) se multiplicará por el factor de dilución y por el volumen de solución diluyente utilizada en el muestreo (100 mL). Para objetos pequeños o para el muestreo de super fi cies interiores de envases, botellas, bolsas de plástico, entre otros, el número de colonias obtenido (ufc) se multiplica por el factor de dilución y por el volumen de solución diluyente utilizado en el muestreo (100 mL) y se divide entre las 4 super fi cies muestreadas (ej. envases, bolsas de plástico).b) Expresión de resultadosLos resultados se expresarán: - Para super fi cies vivas: ufc/ manos. - Para super fi cies internas: ufc/ super fi cie muestreada (ej. envases, bolsas de plástico, etc). c) Interpretación de resultados de acuerdo a los límites microbiológicos SUPERFICIES MÉTODO ENJUAGUEVivas Pequeñas o Internas ENSAYOLímite de Detección del MétodoLímite Permisible (*)Límite de Detección del MétodoLímite Permisible (*) Coliformes totales< 100 ufc/ manos< 100 ufc/ manos< 25 ufc / super fi cie muestreada (**)< 25 ufc/ super fi cie muestreada (**) Staphylococcus aureus< 100 ufc /manos< 100 ufc /manos____ ____ PatógenoAusencia / manosAusencia / manosAusencia / super fi cie muestreadaAusencia / super fi cie muestreada (*) En las operaciones analíticas, estos valores son indicadores de ausencia. (**) Para 4 utensilios. 9. ANEXO 1 Cuadro Referencial sobre Preparación de Medios de Cultivo Los siguientes son los medios de uso más frecuente. Existen otros medios reconocidos y validados por organismos internacionales que podrán ser utilizados. NOMBRE: AGAR BAIRD - PARKER Descripción y Uso:Para el aislamiento y la diferenciación de Esta fi lococos en alimentos y materiales farmaceúticos, según Baird-Parker (1962). Forma de actuación:Este medio de cultivo contiene cloruro de litio y telurito para la inhibición de la fl ora acompañante, en tanto que el piruvato y la glicocola actúan favoreciendo selectivamente el crecimiento de Esta fi lococos. Sobre el medio de cultivo, opaco por su contenido en yema de huevo, las colonias de Esta fi lococos muestran dos características diagnósticas por lipólisis y proteólisis, se producen halos y anillos característicos y, debido a la reducción del telurito a teluro, se des arrollan una colonia negra. La reacción con la yema de huevo y la reducción del telurito se presentan con notable paralelismo con la coagulasa-positiva, y por tanto, pueden utilizarse como índice de esta última. Para una desmostración directa de Esta fi lococos coagulasa-positiva, ha sido recomendado por Stadhouders y col. (1976) el incorporar al medio de cultivo plasma sanguíneo en lugar de yema de huevo. Smith y Baird-Parker (1964) recomiendan añadir sulfametacina para inhibir el crecimiento de Proteus. Composición: (g/L)Peptona de caseína 10,0 Preparación:Disolver 58 g en 0,95 litros, esterilizar en autoclave (15 min. a 121ºC), enfriar a 45-50 ºC, añadir mezclando 50 mL de emulsión de yema de huevo telurito y, eventualmente, 50 mg/ litro de sulfametacina. Verter en placasExtracto de carne 5,0 Extracto de levadura 1,0 Piruvato sódico 10,0Glicina 12,0Cloruro de litio 5,0 pH: 6,8 + 0,2 En tanto que el medio de cultivo basal puede guardarse de 1 a 2 meses a 4ºC, el medio de cultivo completo, vertido en placas ha de ser utilizado dentro de las 24 horas siguientes a su preparación.Agar - agar 15,0 58,0 Aditivos Emulsión de yema de huevo telurito (mL) 50,0eventualmente, sulfametacina (g) 0,05 Empleo e Interpretación:Diluir convenientemente el material a investigar y extenderlo fi namente sobre la super fi cie del medio de cultivo Incubación: Desde 24 hasta 48 horas a 37ºC. Las colonias de Staphylococcus aureus se presentan negras, lustrosas, convexas, de 1 a 5 mm de diámetro, con borde estrecho blanquecino, rodeado por un halo claro de 2 a 5 mm de anchura. Dentro del halo claro presencia de anillos opacos no visibles antes de las 48 horas de incubación.